新生小鼠缺氧缺血性脑损伤模型

新生儿缺氧缺血性脑病(Hypoxic Ischemic Encephalopathy, HIE)是一种因围产期窒息导致的大脑缺氧缺血性损害,对新生儿的生命构成严重威胁,是全世界新生儿死亡和致残的重要原因之一。HIE 死亡率较高,幸存患儿临床表现为一系列脑病症状,如意识障碍、智力发育障碍和运动功能损伤等神经系统后遗症,病情危重者可有惊厥及呼吸衰竭。HIE(缺氧缺血性脑病)动物模型可以模拟和研究HIE的病理生理过程,从而深入理解该疾病的发病机制,并探索潜在的治疗方法。

文献通过手术结扎动物颈总动脉和营造缺氧环境,来模拟HIE缺氧缺血的特点,从而建立新生小鼠缺氧缺血性脑损伤模型[1]。

  1. 实验动物:7日龄,KM新生小鼠,体重2-4g。

    2、实验分组

    ① 假手术组(sham)

    ② 模型组(HIE)

    3、造模方法

    ① 小鼠进行2%~3%异氟烷吸入麻醉,分离并结扎小鼠右颈总动脉。

    ② 手术后回窝休息1h后,置于37℃、缺氧箱(8% O2 + 92% N2)中缺氧90 min。假手术组仅进行麻醉并剥离右颈总动脉处理。

    4、模型评估检测

    1)Morris水迷宫实验,评价小鼠的学习记忆能力。

    2)脑梗死面积测量,脑水含量检测 。

    3)脑组织HE和Nissl染色。

    4)脑组织Ki67免疫荧光染色。

    5)qPCR和western blot,检测相关基因和蛋白的表达。

    6)脑组织切片ROS染色。

    7)组织透射电镜观察。

    5、检测结果

 

1 小鼠HIE后学习记忆能力

1A.小鼠游泳路线的代表图片;1B.60s内小鼠穿越平台次数以评估小鼠HIE后记忆能力,∗P<0.05

 

2 小鼠HIE后脑缺血面积和脑水肿

2A.脑冠状切片;2B.TTC染色脑缺血面积统计结果;2C.脑水含量检测

 

3 小鼠HIE后脑组织形态学损伤

 

4 HIE小鼠海马内源性神经干细胞增殖的变化

4A.real-time PCR检测神经细胞标记基因(MAP2、NeuroD1、Sox2、Nestin);4B.Western blot检测p-Akt,Akt

  1. 模型特点与sham对照组相比,HIE模型组的小鼠有学习和记忆等认知功能障碍。组织病理和标记基因的表达水平检测结果显示,HIE模型组小鼠产生脑梗死和脑水肿,神经元受到损伤,神经干细胞增殖受到抑制。

  2. 参考文献:[1]姚远,赵曼,杜静怡,等.6-姜酚改善新生小鼠缺氧、缺血性脑损伤后认知行为及其机制[J].解剖学报,2023,54(03):296-304.DOI:10.16098/j.issn.0529-1356.2023.03.007.


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