博来霉素肺纤维化小鼠模型

肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)是一种间质性肺疾病的终末期表现,其特征为成纤维细胞增殖及大量细胞外基质沉积,导致肺组织结构的破坏。肺纤维化的病因复杂多样,包括环境因素、药物、疾病因素和遗传因素等方面。肺纤维化目前缺乏有效的治疗药物,美国食品药品监督管理局(FDA)批准的吡非尼酮、尼达尼布虽然能在一定程度上改善临床症状,但存在副作用和药物耐受性问题,因此加强对肺纤维化的机制研究,对新药物研发具有重要意义。
博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的肺纤维化模型,操作简单、可重复性强、与人类疾病的典型特征相似,是目前应用最广泛的PF动物模型方法[1]。
1、实验动物:C57BL/6小鼠,雄性,SPF 级,体质量(28±2)g。
2、实验分组:正常组,模型组。
3、BLM诱导造模:实验动物适应性饲养7天后,小鼠气管内滴注博来霉素,剂量为2.5mg/kg。21天后,取材检测。
4、模型检测
(1)肺系数检测:称量小鼠体重,处死小鼠,完整分离出双肺。 用PBS清洗干净肺组织表面的血迹,吸干肺组织表面水分,立即称量肺湿重, 计算肺系数。

(2)肺功能检测:将小鼠放置在全身体积描记系统的检测仓中,系统平衡后记录10min内气道狭窄指数( Penh)、呼吸频率(frequency,f)和潮气量( tidal volume,TV)等数值,评估小鼠的肺功能情况。

(3)肺组织病理检测:肺组织固定后,进行HE染色、Masson染色。

(4)免疫组化检测:α-SMA

(5)Western blot检测:α⁃SMA、p-Smad3、p-Smad2、Smad 2/3和TGF-β。


5、模型特点
与正常组小鼠相比,模型组小鼠有以下特点:
① 肺质量、 肺系数升高。
② 肺功能相关的Penh值显著增加,f、TV明显降低 ,模型组的肺功能明显改变。
③ 肺泡腔缩小或萎陷,肺泡壁小叶间隔增宽,有大量炎性细胞浸润,大量胶原纤维沉积并有纤维节结生成,Ashcroft评分和胶原面积均升高。
④ 肺组织中的 α-SMA、p-Smad2、p-Smad3和TGF -β蛋白表达明显升高 ,表明BLM可以通过TGF-β/Smad通路诱导小鼠形成明显肺纤维化。
参考文献:
[1]冯嘉文,黄恺,景菲,等.扶正化瘀方调控TGF-β/Smad信号通路对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的影响[J].中成药,2024,46(06):2042-2047.

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