小鼠造血干细胞移植模型

造血干细胞(haematopoietic stem cell,HSC)是一群具有自我更新以及多向分化潜能的特殊细胞群体,主要存在于骨髓中,也可在外周血和脐带血中找到。造血干细胞通过定向分化形成各系造血祖细胞及成熟血细胞,在维持血液系统稳态上起着至关重要的作用。应用造血干细胞移植,是临床上治疗血液以及自身免疫性等疾病的重要策略。通过给免疫缺陷小鼠移植造血干细胞,可以为治疗血液疾病研究提供重要的动物模型。文献中使用的方法如下[1][2]:
1、实验动物:供体小鼠C57BL/6J(白细胞抗原表型为45.2)和受体小鼠B6.SJL(白细胞抗原表型为45.1),6-10周龄。
2、小鼠全骨髓单核细胞(whole bone marrow mononuclear cells,BMNCs)获取:C57BL/6J 供体小鼠安乐死,75%酒精溶液浸泡5min消毒。取小鼠胫骨、股骨和髂骨置于PBE溶液(PBS + 2%血清 + 2 μmol/L EDTA)中,用1mL注射器吸取PBE溶液冲出骨髓细胞,过300目滤网,制备成单细胞悬液。
3、小鼠c-Kit细胞的磁珠富集:获得的小鼠骨髓单个核细胞悬液 300 g离心5min,用1mL PBS进行重悬,每只鼠取出的骨髓细胞加入200 μL CD117磁珠进行标记,4 ℃避光标记30 min,LS柱进行富集,即得到小鼠c-Kit+细胞。
4、小鼠骨髓细胞移植:取8-10周左右B6.SJL小鼠,用X-Ray辐照仪进行致死剂量照射,总剂量8 Gy。照射完成约3 h后,将 5×105 c-Kit+细胞或 1×106 全骨髓细胞与 5× 105 CD45.1保护细胞混合后进行小鼠尾静脉移植。

5、小鼠外周血表型的分析
小鼠移植 2、4、8、12、16 周后,取小鼠尾静脉外周血,红细胞裂解液裂解红细胞,标记抗体,流式细胞仪进行检测。结果显示(图5):两组移植小鼠B细胞在移植后4-8周开始重建,而T细胞的重建时间要晚于B细胞,且c-Kit+细胞移植组重建要早于全骨髓移植组。

参考文献:
[1]肖方楠,吕雪,袁佳佳,等.造血干细胞移植条件对小鼠造血重建的影响[J].生物技术进展,2023,13(01):124-130.DOI:10.19586/j.2095-2341.2022.0180.
[2]陈嘉欣.利用造血干细胞移植建立人源化β-地中海贫血小鼠模型的研究[D].广州医科大学,2021.DOI:10.27043/d.cnki.ggzyc.2021.000144.

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