使用开放性破坏法构建胫骨骨折模型的步骤如下：

一、实验准备

1. 实验动物选择：

   • 选用SPF级SD大鼠，雄性，周龄68周，体重200250克。

2. 术前准备：

   • 术前8小时禁食，自由饮水。
   • 称重并记录大鼠体重。
   • 使用麻醉剂将大鼠麻醉后，剃除左下肢毛发，仰卧固定于泡沫板上，并进行消毒处理。

二、模型构建

1. 手术切口：

   • 在大鼠左下肢胫骨前外侧做纵行切口，长度约0.5~2厘米，具体长度根据实验需要调整。
   • 逐层切开皮肤及肌肉，充分暴露胫骨骨干。

2. 骨折造模：

   • 在胫骨中下1/3交界处，使用手术刀片剔除约3毫米宽的骨膜，显露骨膜下骨质。
   • 使用小电钻或手术刀片横行截断胫骨，造成骨折。

3. 骨折固定：

   • 选取直径0.8毫米的克氏针，穿过膝关节，直视下钻入骨折远折端。
   • 将骨折端予以复位，确保克氏针尾部紧贴膝关节上端，以固定骨折部位。

4. 术后处理：

   • 逐层缝合肌肉及皮肤，不进行外固定。
   • 术后每天腹腔注射青霉素20单位，连续3天，以预防感染。
   • 允许大鼠正常饮水和饮食，确保其舒适。

三、模型验证与观察

1. X线片检查：

   • 分别于手术后第1、2、3、4、5周，麻醉后拍摄右下肢X线片，观察骨折愈合情况。

2. 大体观察：

   • 解剖取骨折处，肉眼观察骨折愈合情况。

3. 组织学检查：

   • 将骨痂组织放入体积分数4%的多聚甲醛中固定24小时。
   • 脱钙4~6周后，进行包埋和切片。
   • 进行HE染色、Masson染色和免疫组化染色（如ALP、BMP、PDGF、VEGF、Runx2等），从细胞和组织层面分析骨折愈合过程。

四、注意事项

1. 手术操作：

   • 在手术过程中，应仔细操作，避免损伤周围的组织、神经和血管。
   • 确保骨折部位的一致性，以提高实验的可重复性。

2. 术后护理：

   • 术后应密切观察大鼠的生命体征，确保无感染和其他并发症的发生。
   • 提供充足的营养和舒适的环境，以促进骨折的愈合。

3. 模型评价：

   • 通过X线片、大体观察和组织学检查等方法，综合评价骨折模型的构建效果和愈合情况。

使用开放性破坏法构建胫骨骨折模型具有操作相对简单、骨折部位一致、对周围组织损伤较小等优点，适用于研究骨折愈合的机制、分子及条件影响等方面。然而，由于骨折部位的开放性，术后感染的风险相对较高，因此需要加强术后护理和观察。