MOG35-55联合百日咳毒素诱导变态反应性脑脊髓炎（EAE）模型构建方法，是一种常用的研究多发性硬化（MS）及其相关自身免疫性疾病的动物模型构建方法。以下是详细的构建步骤和注意事项：

一、实验准备

1. 实验动物：

   • 选用对EAE敏感的近交系小鼠，如C57BL/6小鼠。小鼠的年龄和体重应根据实验需求确定，通常选用6-8周龄的雌性小鼠。

2. 实验材料：

   • MOG35-55多肽：作为诱导EAE的主要抗原，MOG是髓鞘少突胶质细胞糖蛋白的缩写，其35-55位氨基酸序列是诱导EAE的关键片段。
   • 完全弗氏佐剂（CFA）：用于增强抗原的免疫原性，CFA中含有结核分枝杆菌作为佐剂成分。
   • 百日咳毒素（PTX）：作为辅助刺激因子，能够增强EAE的诱导效果。
   • 磷酸盐缓冲液（PBS）：用于溶解MOG35-55多肽和配制其他溶液。

3. 实验设备：

   • 注射器、针头：用于皮下注射和尾静脉注射。
   • 离心管、移液器：用于溶液配制和混匀。
   • 冰盒：用于保持溶液的低温状态。

二、实验步骤

1. 抗原乳剂的制备：

   • 将MOG35-55多肽溶解在PBS中，配制成一定浓度的溶液。
   • 将CFA与MOG35-55溶液按1:1的比例混合，用玻璃注射器反复抽打至油包水状态，制成诱导EAE的抗原乳剂。抽打过程中应在冰上进行，以避免溶液过热导致多肽变性。

2. 实验动物分组与免疫：

   • 将实验小鼠随机分为正常对照组和EAE模型组。
   • EAE模型组小鼠在麻醉状态下，于背部两侧皮下注射制备好的MOG35-55抗原乳剂。注射剂量通常为每只小鼠50-100微升，具体剂量应根据小鼠的体重和实验设计确定。
   • 在首次免疫后的特定时间点（如48小时后），EAE模型组小鼠还需通过尾静脉注射PTX作为辅助刺激因子。注射剂量通常为每只小鼠100微升，PTX的浓度应根据实验设计确定。

3. 行为学观察与评分：

   • 从首次免疫后开始，每日观察并记录小鼠的行为变化。
   • 采用特定的评分标准（如0-10分制）对小鼠的神经功能进行评分，以评估EAE的严重程度。评分标准通常包括尾部无力、后肢瘫痪、前肢无力等症状的表现程度。

4. 实验结束与后续处理：

   • 在实验结束后，通常观察至小鼠发病高峰后的一段时间（如发病后30天），以评估EAE的病程和恢复情况。
   • 处死小鼠后，可取脑和脊髓组织进行病理学检查，以观察炎症细胞浸润、脱髓鞘等病理变化。

三、注意事项

1. 实验动物的选择与饲养：

   • 选用对EAE敏感的近交系小鼠，以减少个体差异对实验结果的影响。
   • 实验前应确保小鼠饲养环境清洁、安静，以减少外界因素对实验结果的影响。

2. 抗原乳剂的制备：

   • 确保MOG35-55多肽和CFA充分混合，制备成均匀的抗原乳剂。
   • 抗原乳剂的制备应在冰上进行，以避免溶液过热导致多肽变性。

3. 注射操作：

   • 注射前应麻醉小鼠，以减少其痛苦和挣扎。
   • 注射时应准确、缓慢地推进注射器，避免漏液或损伤组织。

4. 行为学观察与评分：

   • 观察时应保持安静、舒适的环境，避免外界因素对小鼠行为的干扰。
   • 评分时应客观、准确，以减少主观误差。

5. 实验结束与后续处理：

   • 在实验结束后，应及时处死小鼠并进行后续处理，以减少动物痛苦和伦理问题。
   • 组织病理学检查时应采用多种方法相结合，以提高诊断的准确性。

四、模型特点与应用

1. 模型特点：

   • MOG35-55联合百日咳毒素诱导的EAE模型具有发病率高、病情严重的特点。
   • 该模型能够模拟人类多发性硬化（MS）的部分病理生理特征，如脱髓鞘、炎症细胞浸润等。

2. 应用：

   • 该模型可用于筛选和评价治疗MS及其相关自身免疫性疾病的药物。
   • 通过研究该模型，可以深入了解MS的发病机制，为临床治疗提供理论依据。

通过以上步骤和注意事项，可以成功构建MOG35-55联合百日咳毒素诱导的EAE模型，为研究多发性硬化（MS）及其相关自身免疫性疾病的发病机制和治疗方法提供有力的支持。