线栓法构建大脑中动脉缺血（MCAO）模型是一种常用的实验方法，广泛应用于缺血性脑卒中的研究。以下是线栓法构建大脑中动脉缺血模型的详细步骤：
一、实验准备
实验动物
- 选用健康、成年的雄性SD大鼠，体重一般在250-300克之间。雌性大鼠也可用于实验，但雄性大鼠的血管解剖结构更为清晰，手术成功率较高。
- 实验前，大鼠应在标准饲养条件下适应性饲养一周，以确保其生理状态稳定。
实验器材与试剂
- 手术器械：手术剪、眼科剪、止血钳、眼科镊、持针器、缝合针、缝合线、显微剪、显微镊等。
- 麻醉剂：常用戊巴比妥钠或水合氯醛，剂量需根据大鼠体重计算。
- 线栓：选用合适规格的尼龙线或单丝渔线，线栓头端需经过圆滑处理，如加热成球形或涂抹硅胶，以减少对血管的损伤。线栓长度和直径需根据大鼠体重和血管大小选择。
- 其他辅助材料：加热垫、碘伏消毒液、生理盐水、无菌棉球、缝合线等。
二、手术步骤
麻醉与固定
- 按照大鼠体重计算麻醉剂剂量，通过腹腔注射进行麻醉。
- 待大鼠麻醉后，将其仰卧位固定于手术台上，四肢用医用胶带固定，保持颈部伸展。
备皮与消毒
- 使用电动剃毛器剃去大鼠颈部毛发，用碘伏消毒液擦拭手术区域。
切开皮肤与分离血管
- 在颈部正中线做一纵行切口，长约2厘米。
- 使用眼科剪钝性分离皮下组织，暴露并分离颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA）。分离过程中应注意保护迷走神经，避免过度牵拉。
结扎血管
- 使用止血钳夹闭颈总动脉近心端，用缝合线结扎颈外动脉远心端。
- 在颈总动脉分叉处下方，用缝合线打一活结，以便后续固定线栓。
插入线栓
- 在颈总动脉分叉处上方，用眼科剪剪一小口，将准备好的线栓从切口处插入颈总动脉。
- 沿着颈内动脉的方向，缓慢推进线栓，直至感到轻微阻力。此时，线栓头端应已到达大脑中动脉的起始部，阻塞了大脑中动脉的血流。
- 将颈总动脉分叉处的活结系紧，固定线栓。
缝合切口
- 使用缝合线逐层缝合皮下组织和皮肤，用碘伏消毒液擦拭伤口周围。
再灌注（可选）
- 如果需要构建缺血再灌注模型，可在缺血一定时间后（如1小时、2小时等），轻轻拔出线栓，恢复大脑中动脉的血流。
三、术后护理
保温与苏醒
- 术后将大鼠放置于加热垫上，保持体温恒定在37℃左右，直至其苏醒。
密切观察
- 术后应密切观察大鼠的生命体征和行为变化，如呼吸、心率、体温、精神状态等。
预防感染
- 术后可给予适当的抗生素预防感染，如腹腔注射青霉素等。
四、模型验证与评价
神经功能缺损评分
- 在术后不同时间点（如24小时、48小时等），使用神经功能缺损评分量表（如Longa评分法）对大鼠进行评分，以评估其神经功能损伤程度。
TTC染色
- 在术后适当时间点，处死大鼠并取脑组织进行TTC染色。TTC染色可显示脑梗死区域，通过计算梗死体积占比，评估模型的成功率。
其他指标检测
- 根据实验需要，还可以检测大鼠的脑血流量、脑水肿程度、炎症反应等生理指标，以进一步验证模型的成功建立。
五、注意事项
无菌操作
- 在整个实验过程中，应严格遵守无菌操作规程，防止感染导致实验失败。
手术技巧
- 手术过程中应轻柔操作，避免对血管和神经造成损伤。线栓的插入深度和角度需准确掌握，以确保阻塞大脑中动脉的血流。
动物福利
- 应关注大鼠的福利状况，尽量减少实验过程中的痛苦和不适。实验结束后，应按照动物伦理要求妥善处理大鼠。
通过以上步骤，可以成功构建线栓法大脑中动脉缺血模型。该模型在缺血性脑卒中的发病机制、病理生理变化以及药物治疗效果等方面的研究中具有重要应用价值。
