DNFB（2,4-二硝基氟苯）诱导特应性皮炎（Atopic Dermatitis, AD）模型构建方法是一种常用的实验手段，用于研究特应性皮炎的发病机制、病理变化及新药筛选等。以下是详细的构建方法：
一、实验材料
- 实验动物：通常选用SPF级C57BL/6小鼠或BALB/c小鼠，雌性，7-10周龄，体重18-22克。小鼠应无特定病原体感染，健康状况良好。
- 致敏剂：DNFB，纯度需达到实验要求。
- 溶剂：丙酮与橄榄油按一定比例混合（如4:1或3:1），作为DNFB的溶剂。
- 麻醉剂：如戊巴比妥钠等，用于麻醉小鼠，减少实验过程中的痛苦。
- 其他工具：手术剪、镊子、注射器、计时器、电子秤、脱毛膏、生理盐水、消毒液等。
二、实验步骤
小鼠准备：
- 将小鼠饲养在适宜的环境中，保持温度、湿度和光照的恒定。
- 在实验前，对小鼠进行称重，并记录体重。
- 使用脱毛膏将小鼠背部拟致敏区域的毛发脱净，确保皮肤裸露且清洁。
麻醉小鼠：
- 按照小鼠的体重和麻醉剂的使用说明，计算麻醉剂的用量。
- 通过腹腔注射给予麻醉剂，使小鼠进入麻醉状态。
DNFB致敏：
- 将DNFB溶解于丙酮与橄榄油的混合溶剂中，制备成一定浓度的DNFB溶液（如0.5%或1%）。
- 使用棉签或注射器将DNFB溶液均匀涂抹于小鼠背部的脱毛区域，面积约为2×2厘米。
- 涂抹后，让小鼠自然苏醒，并放回饲养笼中继续饲养。
- 根据实验设计，可能需要在不同时间点进行多次致敏，如第1天、第5天、第8天等。
激发阶段：
- 在致敏后的一定时间（如第14天），使用较低浓度的DNFB溶液（如0.2%）对小鼠进行激发。
- 激发方式同致敏阶段，将DNFB溶液均匀涂抹于小鼠背部或耳部的脱毛区域。
- 激发后，继续观察小鼠的反应，并记录相关数据。
模型验证：
- 在激发后的一定时间（如24小时、48小时等），观察小鼠背部或耳部皮肤的变化，如红斑、水肿、脱屑、结痂等。
- 可以通过皮肤病理切片、HE染色等方法进一步验证模型的构建是否成功。
- 还可以检测小鼠血清中的IgE水平、皮损处的细胞因子表达等，以评估模型的病理生理变化。
三、注意事项
- 小鼠选择：应选用健康、无特定病原体感染的小鼠，并避免使用近亲繁殖的小鼠。
- 麻醉剂用量：需根据小鼠的体重和麻醉剂的使用说明精确计算用量，避免麻醉过度或不足。
- DNFB浓度：DNFB的浓度应根据实验设计和小鼠的敏感性进行调整，以避免过度刺激或刺激不足。
- 致敏与激发时间：致敏与激发的时间间隔和次数应根据实验设计进行合理安排，以确保模型的稳定性和可重复性。
- 实验环境：实验过程中应保持环境的清洁和卫生，避免交叉感染和其他干扰因素。
四、实验意义
DNFB诱导的特应性皮炎模型能够模拟临床上特应性皮炎的发生过程，为特应性皮炎的研究提供了重要的实验工具。通过该模型，可以深入研究特应性皮炎的发病机制、病理变化及新药筛选等，为特应性皮炎的治疗提供新的思路和方法。
