Dert（Der p，尘螨变应原）联合SEB（金黄色葡萄球菌肠毒素B）诱导特应性皮炎（Atopic Dermatitis, AD）模型构建方法是一种模拟复杂环境中特应性皮炎发病机制的动物实验方法。以下是详细的构建步骤及注意事项：
一、实验原理
特应性皮炎是一种慢性复发性炎症性皮肤病，其发病机制涉及遗传、环境、免疫等多种因素。尘螨变应原（Dert）和金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）是常见的特应性皮炎触发因素。Dert通过呼吸道途径致敏机体，引起Th2型免疫反应，导致皮肤炎症。SEB则作为一种超抗原，能够激活大量的T细胞，产生强烈的免疫应答，加剧皮肤炎症。联合使用Dert和SEB，可以模拟复杂环境中特应性皮炎的发病过程，为特应性皮炎的研究提供可靠的动物模型。
二、实验材料
实验动物：
- 常用小鼠品系：BALB/c小鼠、C57BL/6小鼠等。
- 年龄与性别：6-8周龄，雌雄不限（需保持性别一致）。
- 饲养环境：SPF（无特定病原体）级动物房，保持温度、湿度和光照的恒定。
实验试剂：
- Dert（尘螨变应原）：提取自尘螨，用于致敏小鼠。
- SEB（金黄色葡萄球菌肠毒素B）：作为超抗原，用于激发小鼠皮肤炎症。
- 溶剂：如生理盐水、PBS缓冲液等，用于溶解Dert和SEB。
- 麻醉剂：如戊巴比妥钠等，用于麻醉小鼠。
实验器材：
- 剃毛工具：如电动剃毛器、脱毛膏等。
- 涂抹工具：如棉签、移液器等。
- 测量工具：如游标卡尺、电子秤等。
- 病理切片设备：用于皮肤组织病理学检查。
三、实验步骤
小鼠准备：
- 将小鼠饲养在SPF级动物房中，适应环境一周。
- 剃除小鼠背部毛发，露出约3cm²的皮肤区域，注意避免损伤皮肤。
致敏阶段：
- 将Dert溶解于生理盐水中，制备成适当浓度的溶液。
- 使用棉签或移液器将Dert溶液均匀涂抹于小鼠背部剃毛区域。
- 涂抹后，让小鼠自然苏醒，并放回饲养笼中继续饲养。
- 根据实验设计，可能需要多次致敏，每次间隔数天。
激发阶段：
- 在致敏后的一定时间（如第7天），使用SEB进行激发。
- 将SEB溶解于PBS缓冲液中，制备成适当浓度的溶液。
- 使用棉签或移液器将SEB溶液均匀涂抹于小鼠背部剃毛区域。
- 激发后，继续观察小鼠的反应，并记录相关数据。
模型验证与评估：
- 在激发后的一定时间（如24小时、48小时等），观察小鼠背部皮肤的变化，如红斑、水肿、脱屑、结痂等。
- 通过皮肤病理切片、HE染色等方法观察皮肤组织的病理变化，如表皮增厚、炎性细胞浸润等。
- 检测小鼠血清中的IgE水平、皮损处的细胞因子表达等免疫学指标，评估模型的病理生理变化。
四、注意事项
- 实验动物选择：应选择健康、无特定病原体感染的小鼠，并确保饲养条件符合实验要求。
- 试剂浓度与剂量：Dert和SEB的浓度与剂量应根据实验设计和小鼠的敏感性进行调整，避免浓度过高导致皮肤损伤过重或浓度过低影响模型构建效果。
- 涂抹方式与频率：涂抹时应均匀、轻柔，避免液体流至其他区域。涂抹频率和持续时间应根据实验设计进行合理安排。
- 对照组设置：应设立对照组，如只涂抹溶剂的小鼠组，以排除溶剂等非特异性因素对实验结果的影响。
- 模型验证与评估：应采用多种方法进行模型验证与评估，确保模型的稳定性和可靠性。
五、实验意义
Dert联合SEB诱导的特应性皮炎模型能够模拟复杂环境中特应性皮炎的发病过程，为特应性皮炎的研究提供了可靠的动物模型。通过该模型，可以深入研究特应性皮炎的发病机制、病理变化以及评估新药的疗效，为特应性皮炎的治疗提供新的思路和方法。
