恶唑酮（Oxazolone, OXA）诱导特应性皮炎（Atopic Dermatitis, AD）模型是一种常用的实验方法，用于模拟和研究特应性皮炎的发病机制和病理变化。以下是恶唑酮诱导特应性皮炎模型的构建方法：
一、实验原理
恶唑酮是一种半抗原物质，能够破坏皮肤屏障功能，与皮肤组织蛋白结合后形成完全抗原，进而诱导机体产生特异性IgE抗体和Th2型免疫反应，导致皮肤炎症的发生。通过外用恶唑酮对小鼠皮肤进行刺激，可以成功诱导出类似特应性皮炎的病理变化。
二、实验材料
实验动物：
- 常用小鼠品系：BALB/c小鼠或C57BL/6小鼠，因其对恶唑酮敏感且易于诱导皮肤炎症。
- 年龄与性别：6-8周龄，雌雄均可，但需保持性别一致。
实验试剂：
- 恶唑酮：用于诱导皮肤炎症。
- 溶剂：如乙醇、丙酮、橄榄油等，用于溶解恶唑酮。
- 麻醉剂（可选）：如戊巴比妥钠，用于麻醉小鼠以减轻其痛苦。
实验器材：
- 剃毛工具：如电动剃毛器、脱毛膏等。
- 涂抹工具：如棉签、移液器等。
- 测量工具：如游标卡尺，用于测量皮肤厚度。
- 病理切片设备：用于皮肤组织病理学检查。
三、实验步骤
小鼠准备：
- 将小鼠饲养在适宜的环境中，适应一周。
- 在实验前，剃除小鼠背部或耳部毛发，露出约2cm²的皮肤区域，注意避免损伤皮肤。
恶唑酮溶液配制：
- 将恶唑酮溶解于适当的溶剂中，如1%的恶唑酮溶液（溶于乙醇、丙酮和橄榄油的混合液，比例通常为4:1:5）。
初次致敏：
- 使用棉签或移液器将恶唑酮溶液均匀涂抹于小鼠背部或耳部剃毛区域，每只小鼠涂抹约50μL。
- 初次致敏后，将小鼠放回饲养笼中，继续饲养。
激发阶段：
- 在初次致敏后的一定时间（通常为7天），再次使用恶唑酮溶液对小鼠进行激发。
- 激发频率和次数可根据实验设计进行调整，例如每周激发3次，连续激发数周。
模型验证与评估：
- 在激发后的一定时间（如24小时、48小时等），观察小鼠皮肤的变化，如红斑、水肿、脱屑、结痂等。
- 使用游标卡尺测量皮肤厚度，评估皮肤炎症的严重程度。
- 通过皮肤病理切片、HE染色等方法观察皮肤组织的病理变化，如表皮增厚、棘层水肿、淋巴细胞浸润等。
- 检测小鼠血清中的IgE水平、皮损处的细胞因子表达（如IL-4、IL-5、IL-13等Th2型细胞因子）等免疫学指标，进一步验证模型的可靠性。
四、注意事项
- 实验动物选择：应选择健康、无特定病原体感染的小鼠，并确保饲养条件符合实验要求。
- 恶唑酮浓度与剂量：恶唑酮的浓度和剂量应根据实验设计和小鼠的敏感性进行调整，避免浓度过高导致皮肤损伤过重或浓度过低影响模型构建效果。
- 涂抹方式与频率：涂抹恶唑酮时应均匀、轻柔，避免液体流至其他区域。涂抹频率和持续时间应根据实验设计进行合理安排。
- 对照组设置：应设立对照组，如只涂抹溶剂的小鼠组，以排除溶剂等非特异性因素对实验结果的影响。
- 动物福利：在实验过程中应遵循动物伦理原则，尽量减少小鼠的痛苦和不适。
五、实验意义
恶唑酮诱导的特应性皮炎模型能够模拟临床上特应性皮炎的发病过程，为研究特应性皮炎的发病机制、病理变化以及评估新药的疗效提供了可靠的动物模型。通过该模型，可以深入研究特应性皮炎的免疫机制、皮肤屏障功能障碍以及环境因素对皮肤炎症的影响等，为特应性皮炎的治疗提供新的思路和方法。
