一、实验动物选择
种系选择:小鼠:优先选用BALB/c或C57BL/6品系,雄性,5-6周龄,体重20-25g。
大鼠:常用雄性SD大鼠,6-8周龄,体重120-180g。
豚鼠:健康雄性豚鼠,体重300-500g,适用于模拟儿童哮喘特征。
二、模型构建流程
1. 致敏阶段
致敏剂配制:OVA与氢氧化铝佐剂混合(如小鼠:0.1-0.2mg OVA + 2.25mg氢氧化铝/只;大鼠:10mg OVA + 200mg氢氧化铝/只),以生理盐水或PBS溶解。
致敏方法:腹腔注射:小鼠:第0、7天注射0.2ml致敏液,或隔日注射7次(共14天)。
大鼠:第1、8天注射1ml致敏液,部分研究加强致敏至4次。
2. 激发阶段
激发剂配制:1-5% OVA溶液(生理盐水或PBS溶解),雾化液浓度为1%时适用于大鼠,5%适用于小鼠。
激发方法:雾化吸入:动物置于密闭雾化箱,雾粒直径3-5μm,每日1次,每次30分钟,小鼠连续7天,大鼠持续14天。
滴鼻激发(仅小鼠):第21天起麻醉后滴入50μL 1-2% OVA溶液,连续7天。
三、模型评价指标
症状观察:激发后10分钟内记录喷嚏、喘息、搔鼻次数。
病理学检测:HE染色:肺组织显示肺泡结构破坏、支气管周围炎性细胞浸润、杯状细胞增生及气道重塑。
AB-PAS染色:检测气道黏液分泌增多。
炎症因子与免疫指标:血清检测:总IgE及IL-4、IL-5、IL-13等Th2型炎症因子显著升高。
肺泡灌洗液(BALF):嗜酸性粒细胞比例增加,IL-4、IL-5水平上升。
四、注意事项
剂量与周期优化:小鼠OVA腹腔注射剂量需≤0.2mg/次,避免过度激发导致急性过敏反应。
操作规范:雾化时需控制雾粒大小(3-5μm),确保沉积于气道而非肺部深处。
滴鼻操作需完全麻醉动物,避免激发液误入消化道。
模型验证:需同步设置PBS对照组,验证病理改变、炎症因子升高及症状评分差异。
说明:该模型通过Th2型免疫反应模拟气道炎症与高反应性,适用于哮喘机制研究与药物疗效评估13。不同动物种系的激发方案需结合研究目标调整。